分光光度法是指應(yīng)用分光光度計(jì)的分析方法，具有靈敏、準(zhǔn)確、快速及選擇性好等特點(diǎn)。

通常所測(cè)樣品溶液濃度下限可達(dá)10-6~10-5mol/L，適用于測(cè)定食品中的微量組分（如肉制品中的亞硫酸鹽、糖果中的二氧化硫等）。

一、原理

1.1 物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收

當(dāng)光束照射到物質(zhì)上時(shí)，光與物質(zhì)發(fā)生相互作用，產(chǎn)生反射、散射、吸收或透射。

若被照射的是均勻溶液，光的散射可以忽略。

1.1.1 溶液顏色的產(chǎn)生

當(dāng)一束白光通過(guò)某一有色溶液時(shí)，一些波長(zhǎng)的光被溶液吸收，另一些波長(zhǎng)的光則透過(guò)溶液。

透射光或反射光刺激人眼使人感到顏色的存在。

人把自身能感覺(jué)到的光定義為可見(jiàn)光。

在可見(jiàn)光區(qū)，不同波長(zhǎng)的光呈現(xiàn)不同的顏色，因此溶液的顏色由透射光的波長(zhǎng)所決定。

透射光與吸收光可組成白光，故稱(chēng)這兩種光互為補(bǔ)色光，兩種顏色互為補(bǔ)色。

1.1.2 光吸收的本質(zhì)

當(dāng)一束光照射到某物質(zhì)或其溶液時(shí)，組成該物質(zhì)的分子、原子或離子與光子發(fā)生“碰撞”，光子的能量就轉(zhuǎn)移到分子、原子或離子上，是這些粒子由最低能態(tài)（基態(tài)）躍遷到較高能太（激發(fā)態(tài)），這個(gè)作用稱(chēng)為物質(zhì)對(duì)光的吸收。

被激發(fā)的粒子約在10-8s后回到基態(tài)，并以熱或熒光等形式釋放出能量。

分子、原子或離子具有不連續(xù)的量子化能級(jí)，僅當(dāng)照射光光子的能量hυ，與被照射物質(zhì)粒子的基態(tài)和激發(fā)態(tài)能量之差相當(dāng)時(shí)，才能發(fā)生吸收。

不同物質(zhì)微粒由于結(jié)構(gòu)不同而具有不同的量子化能級(jí)，其基態(tài)和激發(fā)態(tài)能量差也不相同。

所以物質(zhì)對(duì)光的吸收具有選擇性。

1.1.3 吸收曲線

吸收曲線，也稱(chēng)為吸收光譜，描述了物質(zhì)對(duì)不同波長(zhǎng)的光的吸收能力。

將不同波長(zhǎng)的光透過(guò)某一固定濃度和厚度的有色溶液，測(cè)量每一波長(zhǎng)下有色溶液對(duì)光的吸收程度（即吸光度），然后以波長(zhǎng)為橫坐標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)作圖，繪制的曲線即為吸收曲線。

不同濃度的同一物質(zhì)，在吸收峰附近的吸光度隨著濃度增加而增大，但最大吸收波長(zhǎng)不變。

若在最大吸收波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，則靈敏度最高。

因此，吸收曲線是分光光度法中選擇測(cè)定波長(zhǎng)的重要依據(jù)。